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编辑:凯恩/2019-03-02 05:53

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  手足口病是五岁以下儿童中常见的病毒性传染病,肠道病毒71型(EV71)是引起儿童手足口病的最重要病原体,主要通过粪口途径传播,感染的患儿可能表现出严重的神经系统损伤和并发症,如脑干脑炎、脊髓灰质炎样的瘫痪和肺水肿等症状,甚至危及患儿生命。然而由于自然界中绝大部分微生物尚难以培养,而且细胞在纯培养状态往往无法体现其“原位”功能,因此“如何原位考察细胞间代谢互作”一直是微生物组方法学研究的重点与难点之一。5月1日脊灰疫苗免疫策略调整后,我国将实行“1剂IPV+3剂OPV”的免疫程序,即儿童的四次脊灰疫苗接种中,接种1剂脊灰病毒灭活疫苗,其他三次接种减毒活疫苗。中国科学院上海巴斯德研究所疫苗学和抗病毒策略研究组致力于基于病毒样颗粒(VLP)的手足口病基因工程疫苗研发,前期工作已经利用昆虫细胞表达系统,完成了EV71单价、CA16单价及EV71/CA16双价VLP疫苗的临床前有效性验证(Vaccine 2012;PLoS ONE 2013;Vaccine 2014)。大肠杆菌“单身”时完全不能利用柠檬酸,但在与不动杆菌“同居”时却表现出了一定的综合代谢活性。反向拉曼标记技术结合“碳源-重水”双标记实验发现,在柠檬酸作为唯一碳源的共培养体系中,不动杆菌可快速利用柠檬酸,并展现了较高的综合代谢活性。IPV通常由遴选的脊灰野病毒株或者脊灰疫苗株灭活制成。同时,通过重水饲喂,观测2180 cm-1附近C-D峰的出现,以同时监测细胞的综合代谢活性。单细胞拉曼成像与活细胞稳定同位素标记相结合的技术,能分辨群落内代谢特定底物的细胞,从而重建“食物链”的时空特征。我国自1965年开始全国范围内接种口服脊灰减毒活疫苗(OPV),并在2000年通过世卫组织的认证,实现了无脊灰目标,但由于邻近多国仍有脊灰野病毒的流行,为防止脊灰输入病例的发生,2000年以来我国仍然继续使用三价脊灰减毒活疫苗。该项研究成果的研究论文High-yield production of recombinant virus-like particles of enterovirus71 inPichiapastoris and their protective efficacy against oral viral challenge in mice 于4月23日在国际疫苗学期刊Vaccine上在线发表。当前微生物组功能分析的主要工具,如元基因组、元转录组、元代谢组、稳定性同位素核酸探针(DNA/RNA-SIP)技术以及高通量培养技术等,通常难以揭示原位状态下群落中的各个成员在代谢功能上的互作关系。为提高手足口病基因工程疫苗的产业化潜力,该课题组着眼于开发一种更高产廉价的手足口病VLP疫苗。针对上述瓶颈,青岛能源所单细胞中心王允带领的研究小组打破了传统拉曼标记策略的思维定势,先使用13C标记的广谱碳源(如葡萄糖等)把群落中所有细胞都“喂饱”,再将碳源切换为未经标记的目标底物,然后通过观测单细胞拉曼光谱中目标底物代谢并替换细胞中13C标记化合物的过程,也就是测量13C拉曼峰反向漂移到12C位置的动态特征,从而分辨群落中特异性地代谢目标底物的细胞。IPV和OPV一起使用,对儿童起到的保护效果更佳,既有助于减少脊灰减毒活疫苗所致的相关病例的发生,同时也可有效降低脊灰野病毒输入和传播风险。该工作近期发表于《分析化学》(Analytical Chemistry)。研究成果已在Molecular Plant上发表题为Frequent Introgressions from Diploid Species Contribute to the Adaptation of the Tetraploid Shepherd’s Purse (Capsella bursa-pastoris)的文章。论文信息:Wang Y.郭亚龙研究组博士生韩廷申为论文的第一作者。

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